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淺析影響分光光度計吸光值漂移的因素

點擊次數:58 發布時間:2021-08-18
  分光光度計讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。事實上,分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,即分光光度計有一定的準確度和精確度。
 
  1、核酸本身物化性質:
 
  溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測試時,離子濃度太高也會導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩定讀數。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0),才能得到精確的檢測結果。水的pH值不穩定,可能導致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內存在自身吸收,為了確保準確測量,請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
 
  2、樣品的稀釋濃度:
 
  樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素,由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了z大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高(超過光度計的測試范圍)。
 
  3、分光光度計操作因素:
 
  如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值;混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
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